解读|新型冠状病毒肺炎如何被快速检测？

2020-01-22 07:57已围观次

武汉新型冠状病毒感染的肺炎病例数激增。1月20日0-24时，国家卫建委收到国内3省（区、市）报告新增新型冠状病毒感染的肺炎确诊病例77例，其中湖北省72例。而据武汉卫健委通报，1月20日0时—1月20日24时，武汉市新型冠状病毒肺炎确诊患者新增病例60例，18日、19日两日总计新增136名确诊患者，其中18日增59人，19日增77人。相较于16日新增4人，短短四日间，新增确诊患者数目激增。

复旦大学附属华山医院施光峰教授对财新记者表示，病例人数激增的原因之一可能是检测手段提高。近期多家公司表示，已根据病毒基因组序列信息完成对新型冠状病毒（2019-nCov）核酸检测试剂盒的开发。1月11日，上海市公共卫生临床中心、华中科技大学武汉中心医院、武汉市疾控中心、中国疾控中心传染病预防控制所联合澳大利亚悉尼大学，在Virological网站上发布了“武汉肺炎”病例中的新型冠状病毒基因组序列信息。1月19日，国家卫健委通报称，已下发新型冠状病毒核酸检测试剂盒，要求各地加强检测。

财新记者从上海辉睿生物科技有限公司（下称）和上海捷诺生物科技有限公司（下称）了解到，两家公司针对2019-nCov的设计生产的PCR检测盒子已经通过国家疾控中心的认证，目前在全国各个省市地级市投入使用。

由于武汉发热病人基数庞大，在没有快速检测试剂盒的情况下，要对可疑病人进行检测，调查其流行病学背景，例如发病史、密切接触人群、可能的感染源等，追踪密切接触者，都需要较长时间。

据介绍，两家公司采用的检测方法均为实时荧光定量聚合酶链式反应法（PCR）。捷诺生物一位市场部人士告诉财新记者，PCR检测盒子是根据病毒的基因序列，遵循一定规律配出对应的探针，用探针去检测病毒。因此在不知道基因序列的情况下，实现快速检测是非常困难的。“病毒最开始出现时是一个未知病原体，大家不知道病毒的基因型是什么样的，检测自然比较困难。”他说，中国疾控中心测出并公布病毒2019-nCov的序列后，该公司随即根据病毒基因序列进行了相应的PCR检测产品设计。

聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定DNA片段的分子生物学技术，其最大的特点是能将微量的DNA大幅扩增。荧光PCR检测则是一种常用的快速检测方法，其原理是随着PCR的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号。最后通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。因此，实时荧光定量PCR可以通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。

辉睿生物的一位技术人员告诉财新记者，该公司的检测盒子采用的检测原理也是荧光PCR检测，利用引物探针去扩增病毒靶序列，根据目前中国疾控中心出的诊疗方案中提供的三个靶点，有任何两个靶点呈现阳性，都可以断定病毒为新型冠状病毒2019-nCov。检测结果若呈阳性就会呈现出一条曲线；阴性就是一条平线。

针对检测盒子的灵敏度和效率，前述辉睿生物相关人士表示，2019-nCov的体外诊断试剂的实际灵敏度仍然需要严格的临床验证过程。目前由于疫情传播形势紧迫，紧急上临床使用，实际灵敏度后续还需要试剂临床数据的跟进。但从技术角度来看，在检测突变方面可以达到1%的突变。也就是说，一个房间里面在单位体积人类的DNA里只要出现一个目标病毒的DNA，就可以检查出来。就该公司目前与中国疾控中心合作的临床数据来显示，阳性符合率达到100%，即临床断定高度疑似阳性患者，经PCR检测也呈阳性。

捷诺生物公司相关人士向财新记者表示，实时荧光定量PCR是分子层面上的检测，就现有所有的快速检测方法来看，这种方法检测的特异性和灵敏度都是最高的。由于这一检测方法靠的是分子层面的特异性结合，因此只要公布的基因序列没有问题，相关技术的检测准确率可以达到99.9%。通常在1-2小时之内即可得到检测结果。目前捷诺生物生产的检测盒子，最低检出线为5000个拷贝。最低检出线是检测灵敏度的主要指标，5000个拷贝意味着当病毒数量超过5000的时候就会被检测到；如果检验结果少于5000，则不被认为是阳性。

除上述两家公司外，另有包括、等多家上市公司已发布公告表示，完成完成对2019-nCov核酸检测试剂盒的开发，但大多数公司亦表示产品只供科研和检测使用，尚未用于治疗。